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Nano HPLC
E' una tecnica cromatografica relativamente nuova che ha una considerevole importanza in proteomica dove è importante lavorare su esigue quantità di campione ed è importante usare flussi di solventi molto piccoli riducendo il diametro interno del sitema di trasporto dei solventi e delle colonne cromatografiche. La riduzione dei volumi e del diametro delle colonne e del diametro delle sfere che compongono le resine cromatografiche permette l'analisi di campioni proteici derivanti da un singolo spot proveniente dalla separazione elettroforetica in 2 dimensioni, che risulterebbe troppo diluito se analizzato con le normali tecniche HPLC.
La riduzione dei volumi e dei flussi di solvente della nano HPLC permette, anche, di interfacciare direttamente l'uscita dello strumento con uno spettrometro di massa.
La Nano HPLC viene anche definita nanobore o nano-scale HPLC, è importante notare che la definizione di nanoHPLC non è legata al diametro interno della colonna utilizzata ma piuttosto ai flussi dei solventi che sono dell'ordine dei nanolitri al minuto.
I principi base della nano HPLC sono gli stessi della tecnica tradizionale ma sono differenti i vantaggi e sono presenti anche alcuni svantaggi:
Pro
- La sensibilità è notevolmente aumentata, specialmente se la nanoHPLC è utilizzata accoppiata ad uno spettrometro di massa, diventa possibile rilevare peptidi presenti nel campione in concentrazioni dell'ordine delle attomoli.
- Si riduce il consumo di solventi e, quindi, la produzione di rifiuti.
- La riduzione del diametro delle colonne oltre ad incrementare la sensibilità permette di analizzare campioni in volumi ridotti.
- La riduzione del diametro del materiale di impaccamento delle colonne permette di avere picchi maggiormente risolti grazie ad una maggiore efficienza separativa.
- Le contropressioni non aumentano troppo.
- Permette di utilizzare uno spettrometro di massa come rivelatore, senza necessariamente utilizzare sistemi di splittaggio del flusso.
Contro
- Il sistema della fluidica è delicato.
- Aumentano le probabilità di avere un intasamento dei tubi e della colonna.
- I chip e le colonne per l'analisi sono abbastanza costose, se non prodotte in laboratorio.
- Sistema di separazione basato su microfluidica su chip, con sezione dei canali rettangolare.
- Colonne capillari nano a sezione circolare e con diametro interno di circa 25-100µm
Il termine nanoHPLC ancor oggi non è definito chiaramente, inoltre esistono due tipi di nano HPLC:
Classificazione dei sistemi HPLC:
| Descrizione | Diametro interno | Range di flusso |
| open tubular LC | < 25µm | < 25nL/min |
| Nano HPLC | 25-100 µm | 24-4000 nL/min |
| Capillary HPLC | 100-1000 µm | 0.4-200 µL/min |
| Micro HPLC | 1.0-2.1mm | 50-100µL/min |
| Standard HPLC | 4.0-5.0 mm | 1-10ml/min |
| Preparative HPLC | > 10 mm | > 20ml/min |